注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測(cè)定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化為Fe³⁺ ，導(dǎo)致536nm吸光度下降，樣品對(duì)536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備用品：

恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100 mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體12mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體12 mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存。

樣品的制備：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測(cè)定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如5 mg/mL。

操作步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至536nm。

2、 工作液配制：使用之前按照每管試劑一：試劑二：試劑三=100:50:100（µL）的比例配制，用多少配多少，混勻。

3、 在EP管中加入如下試劑

注意：空白管和對(duì)照管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式:

羥自由基清除率 D% =（A測(cè)-A對(duì)）÷（A空-A對(duì)）×100%

A空、A對(duì)、A測(cè)：空白管、對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值。

注意事項(xiàng):

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對(duì)于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。