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人雌激素 ELISA試劑盒說明書

更新時間:2012-07-24   點(diǎn)擊次數(shù):1928次

 

人雌激素 ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                          96T
0pg/ml-160pg/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中雌激素含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人雌激素水平。用純化的人雌激素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入雌激素,再與HRP標(biāo)記的雌激素抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌激素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人雌激素濃度。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品(160pg/ml)
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4. 血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
6. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
7. 培養(yǎng)細(xì)胞
     檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
8. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
自備材料
1 蒸餾水。
2 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul
3 振蕩器及磁力攪拌器等
 
操作步驟
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.          

80pg/ml
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40pg/ml
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20pg/ml
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10pg/ml
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5pg/ml
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 
 
3.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
4.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
5.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
6.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
7.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
8.         溫育:操作同3。
9.         洗滌:操作同5。
10.     顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
11.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
12.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
 
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990
2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4. 局限性:6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8。
2.有效期:6個月
 
 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)elisa試劑盒生產(chǎn)商,elisa試劑盒代理商,elisa試劑盒批發(fā),本公司試劑盒種類齊全,包括人、大鼠、小鼠、兔、羊、馬、牛、豚鼠、猴、魚、植物、食品等,近千種試劑盒已經(jīng)投入市場,被廣大科研工作者所使用,備受客戶的青睞如需了解elisa試劑盒價格及產(chǎn)品更多詳細(xì)說明,請:   手機(jī)    何
 
 
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人游離甲狀腺素(FT4)ELISA Kit Human Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit
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人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit Human Crosslaps,Cr ELISA Kit
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA Kit Human cross-linked C-opeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit Human deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit
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人P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA Kit Human substance P receptor,SP-R ELISA Kit
人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA Kit Human calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit
人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )ELISA Kit Human skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit
人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit Human Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA Kit
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人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA Kit Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit

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