在ELISA試劑盒中運(yùn)用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。

多抗取白免疫動(dòng)物的抗血清，制備較簡(jiǎn)略，但抗血清成分凌亂，除含針對(duì)抗原（多個(gè)表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對(duì)要低于單抗，且制備周期長(zhǎng)，批間差異較大。而單抗僅針對(duì)抗體的單一表位，ELISA試劑盒親和力和特異性均較多抗高，且制備技能老練，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點(diǎn)的單一也正是其缺陷之地址，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體運(yùn)用同一單抗，則由于結(jié)合位點(diǎn)的短少，簡(jiǎn)略構(gòu)成假陰．性成果。在運(yùn)用雙單抗一步法時(shí)，應(yīng)留意抗原過剩時(shí)的“鉤狀效應(yīng)"。

在ELISA試劑盒中運(yùn)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即天然抗原、人工組成抗原和基因重組抗原。天然抗原的純度不高，特異性不強(qiáng)；組成抗原一般為多肽片段，短少天然抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)表位，親和力不高，可能導(dǎo)致相應(yīng)表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強(qiáng)、親和力高、產(chǎn)量大等特征，是一種比較志向，但其純化比較困難。