做ELISA實驗，有幾種常見的實驗方法，他們分別是競爭法、捕獲法、間接法、夾心法、而夾心法又可以分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法！在今天的文章中，將詳細得跟大家講述雙抗體夾心法！
雙抗體夾心法，其基本原理是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無關蛋白載體封閉未結合位點，然后加入待檢標本，通過加入檢測抗體，酶標記第二抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈正相關。
該方法的適用條件是：含有多個抗原表位的大分子物質。因為這種檢測方法需要兩種抗體，所以就涉及抗體配對的問題。一般而言，常用的抗體配對方法有一下幾種：包被抗體為單抗，檢測抗體為多抗；包被抗體為單抗，檢測抗體為單抗，但這兩種單抗針對的抗原表位不同；包被抗體為多抗，檢測抗體為多抗，這兩種多抗一般是來源于不同的宿主。
這種檢測方法在應用酶標第二抗體時，應該注意的一個原則是：第二抗體必須只能針對檢測抗體，而不能針對包被抗體。鑒于酶標二抗的局限性，現在一般廠家都引入生物素親和素放大系統，這種系統在提高反應靈敏度的同時，應用起來也更加方便，我們只需要對檢測抗體進行生物素標記，不需要對每一種不同來源的二抗進行酶標記，只需對親和素做HRP標記就可以省去很多繁瑣的工作。
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